用途:当输入为 Illumina BCL 运行文件夹,或用户要求对测序运行做 demultiplexing 时使用。该技能侧重运行校验与拆分规划,而非单纯命令封装。
主要能力:校验 RunInfo.xml、可选 RunParameters.xml、BaseCalls 目录、SampleSheet 行、重复 lane/index 组合与 index 长度兼容性;规划 lane 拆分或合并、index 错配容忍度、index 读段结构与双 index 方向、UMI 布局、转换时是否做 adapter 修剪/屏蔽;转换后审阅拆分指标。
使用方式:先做预检:python plugins/ngs-analysis/scripts/ngs_preflight.py --pipeline bcl_to_fastq --emit-install-plan,并检查运行目录结构(RunInfo.xml、SampleSheet.csv、BaseCalls 目录)。本地执行使用插件自带 runner:python plugins/ngs-analysis/scripts/run_bcl_to_fastq.py --run-folder /path/to/run --sample-sheet /path/to/SampleSheet.csv --output-directory /path/to/fastq_out,仅在确认转换时加 --execute。工具优先使用已安装的 bcl-convert,其次为旧版 bcl2fastq;两者都不存在时记录阻塞,不自动下载专有软件。
指标审阅:转换后报告各 lane 的总簇数、通过过滤簇数与产量,各样本分配比例与 undetermined 比例,undetermined 高频 index 序列,各样本 FASTQ 计数与 read-pair 一致性,以及 index hopping、barcode 冲突或 sample sheet 不匹配信号。记录软件版本、命令、sample sheet 校验和、运行与输出路径。
限制:bcl-convert 为 Illumina 专有 RPM 分发软件,本地免费使用但未经用户明确同意不得自动下载;双 index 方向不得从文件名推断;严重拆分异常未呈现前不应开始下游分析。