用途:为 Western blot 图像分析提供标准化工作流,尤其面向含多个实验重复与条件的实验,覆盖条带强度检测、归一化、统计汇总与可视化。
主要能力:使用 analyze_pixel_distribution 与 find_roi_from_image 进行图像预处理与条带检测,必要时调整 lower_threshold、upper_threshold 重试,或参照已正确检测的 ROI 手动推断未检出 ROI(须保留已正确 ROI 坐标)。区分靶蛋白、内参与背景强度,按条件名、重复号、靶蛋白、原始强度记录。
必要用法:单靶蛋白用单步归一化(Target / LoadingControl);同时测量总量与修饰形式时用两步归一化,先 TotalForm_norm = TotalForm / LoadingControl,再 ModifiedForm_target = ModifiedForm / TotalForm_norm。随后在每个重复内计算相对对照的倍数变化 Fold_Change = Target_norm_condition / Target_norm_control,再跨重复汇总均值与误差(SD 或 SE,SE = SD / √n)。常见内参为 GAPDH、β-actin、α-tubulin 或总蛋白染色。图形可用柱状图加误差棒,注明 n 与误差类型,建议 300 DPI。
限制与注意事项:Western blot 单次为一个观测,结论需生物学重复;最小建议 n=3,小效应(约 1.5 倍)建议 n≥4–6;内参不得饱和,需在线性动态范围内;不应使用原始强度直接比较,不应先在重复间聚合再算倍数变化;排除异常重复须有依据并记录。其他实验设计与软件环境细节暂未提供。