用途:MACS3(Model-based Analysis of ChIP-seq)从 ChIP-seq、ATAC-seq、CUT&RUN、CUT&TAG 数据中识别显著富集的读段区域(峰值)。它可从双端数据建模片段长度,或从单端数据的单核小体读段位移估计,再用 Poisson 模型计算相对 input/IgG 对照的倍数富集,输出 BED 格式的 narrowPeak(转录因子)或 broadPeak(组蛋白修饰)文件,含信号与 q 值轨迹,便于在 IGV 或 UCSC 浏览。
主要能力:支持转录因子结合位点、开放染色质(ATAC)和宽泛组蛋白修饰(如 H3K27me3)的峰值识别;可用 -B --SPMR 生成归一化 bedGraph/bigWig 信号轨迹;峰值可作 DiffBind 或 DESeq2 差异结合分析输入;HMMRATAC 可做核小体分辨率 ATAC 峰值识别。
使用方式:需 Python ≥3.8 的 macs3 包,输入为排序并建索引的 BAM。安装:pip install macs3 或 conda install -c bioconda macs3;验证:macs3 --version。运行前先执行 command -v macs3 检查是否已存在;在 pixi 项目内用 pixi run macs3。典型命令:macs3 callpeak -t chip.bam -c input.bam -f BAM -g hs -n sample_tf --outdir peaks/ -q 0.05。ATAC 双端推荐 -f BAMPE --nomodel --nolambda --keep-dup all;单端加 --shift -100 --extsize 200。宽峰用 --broad --broad-cutoff 0.1。
适用场景:转录因子 ChIP、组蛋白修饰 ChIP、ATAC-seq 开放染色质、CUT&RUN/CUT&TAG;ENCODE 推荐为标准工具。
限制:需先排序建索引 BAM;无对照时需 --nolambda;ATAC 若沿用 ChIP 默认参数会得到看似合理但错误的峰值;线粒体读段需过滤;片段建模失败可加 --nomodel --extsize 200;gsize 需与参考基因组匹配。具体收费、价格与平台信息暂未提供。