用途:该技能提供从FASTQ到克隆型多样性指标的TCR/BCR免疫组库端到端分析流程,适用于bulk或单细胞免疫组库测序数据。
主要能力与流程:
- MiXCR处理:用mixcr align将reads比对到V(D)J片段,命令为 mixcr align -s hsa -p rna-seq R1.fastq.gz R2.fastq.gz aligned.vdjca;再用 mixcr assemble aligned.vdjca clones.clns 组装克隆型;最后用 mixcr exportClones clones.clns clones.txt 导出。
- VDJtools分析:用 vdjtools Convert -S mixcr clones.txt vdjtools/ 转换格式;用 vdjtools CalcDiversityStats vdjtools/clones.txt diversity/ 计算多样性指标;用 vdjtools CalcPairwiseDistances vdjtools/*.txt overlap/ 计算样本重叠。
- 可视化:用 vdjtools PlotFancySpectratype vdjtools/clones.txt spectra/ 绘制谱型图;用 vdjtools PlotFancyVJUsage vdjtools/clones.txt usage/ 绘制V使用图。
QC检查点:比对后检查V/J分配率(典型>70%);组装后核对克隆型数量与覆盖度;多样性计算后与预期范围比较。
相关技能:tcr-bcr-analysis/mixcr-analysis(MiXCR详细用法)、tcr-bcr-analysis/vdjtools-analysis(多样性指标)、tcr-bcr-analysis/repertoire-visualization(绘图)。
限制:资料未提供具体软件版本、安装方式、参数调优细节、运行环境要求及结果解读阈值,需结合实际情况确认。