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bio-differential-expression-edger-basics

数据与分析

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更新于 10-15 21:55

技能介绍

用途:对 bulk RNA-seq 原始整数计数矩阵与分组标签,做差异表达分析,输出按显著性排序的基因列表,并在小样本下控制假阳性率。

主要能力:以 DGEList 构建数据对象;用 filterByExpr 做设计感知过滤;用 normLibSizes 做 TMM/TMMwsp 归一化(归一化因子作为 GLM 的 offset,不直接除计数);用 estimateDisp 估计负二项离散度;用 glmQLFit + glmQLFTest 做拟似然 F 检验;支持 glmTreat 的倍数变化阈值检验、无截距设计下的 makeContrasts 对比、voom/voomWithQualityWeights 的 limma 路线,以及 catchSalmon 的转录本水平分析。

必要用法:标准流程为 DGEList -> filterByExpr -> normLibSizes -> estimateDisp(robust=TRUE) -> glmQLFit(robust=TRUE) -> glmQLFTest -> topTags。过滤须在归一化与离散度估计之前完成;robust=TRUE 需在 estimateDisp 与 glmQLFit 两处同时设置。

适用场景:常规 bulk RNA-seq(每组 n>=3)、小样本(n=2-3)、文库大小差异大或 RIN 不均、多组对比、转录本水平 DE、单细胞 pseudobulk、跨工具一致性检查。

限制:glmQLFTest 为现代默认,glmLRT 在小 n 下偏保守不足;exactTest 仅限两组单因素;TMM 假设多数基因不变,在细菌应激、病毒宿主关闭、MYC 扩增等场景会失效;edgeR 无 DESeq2 式自动独立过滤,跳过 filterByExpr 会显著影响结果;v4 默认 legacy=FALSE,与 v3 结果存在差异,需 legacy=TRUE 复现旧结果;decideTestsDGE 在 v4 已移除,改用 decideTests。版本参考:edgeR 4.0+、limma 3.58+、statmod 1.5+、tximport 1.30+。