用途:对 ATAC-seq 文库做质量评估,回答“文库是否达到 ENCODE 质量标准”,并诊断失败原因。
主要能力:计算七项经典指标——测序深度、比对率、线粒体读段比例、文库复杂度(NRF/PBC1/PBC2)、插入片段大小周期性、TSS 富集、FRiP,并与 ENCODE 4 阈值比较。支持跨重复样本相关性(deepTools multiBamSummary、plotCorrelation、plotFingerprint)、preseq 复杂度外推、性染色体 QC(chrY 读段比例、XIST 位点可及性)、细胞周期影响评估、spike-in 归一化,以及汇总为 MultiQC 可读的 PASS/FAIL 报告。
必要用法:CLI 使用 picard CollectInsertSizeMetrics、samtools flagstat/idxstats、deeptools plotFingerprint 与 computeMatrix reference-point + plotProfile;R 使用 ATACseqQC::TSSEscore、fragSizeDist、PTscore;Python 用 pysam 与 pyBigWig 自行计算 NRF/PBC 和 TSS 富集。示例命令:preseq c_curve -B sample.bam -o sample.ccurve.tsv -s 1e6;preseq lc_extrap -B sample.bam -o sample.lcextrap.tsv -e 200000000 -s 5000000。
限制:ENCODE 阈值因物种而异,小鼠 TSS 富集 ≥5 可接受,非模式生物无公开阈值;ENCODE 与 ATACseqQC 的 TSS 富集算法不同,数值不可直接比较;NRF/PBC 需在去重前计算;线粒体比例过高或过度转座等失败通常无法事后修复,需重新建库。资料未提供具体安装命令与收费信息。